研究撷英丨托法替布通过JAK-STAT3通路调控Th17.1细胞治疗难治性重症肌无力的临床研究与机制探索

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研究撷英丨托法替布通过JAK-STAT3通路调控Th17.1细胞治疗难治性重症肌无力的临床研究与机制探索

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Neurotherapeutics在线发表了题为“Targeting Pathogenic Th17.1 Cells via JAK-STAT3 pathway: A Novel Approach with Tofacitinib for Refractory Myasthenia Gravis”的研究成果。该研究通过单细胞测序、临床队列研究及体外实验系统阐述了JAK抑制剂托法替布（Tofacitinib）在治疗难治性重症肌无力（MG）中的疗效及其免疫调节机制。

研究背景

MG是一种主要由T、B细胞参与，自身抗体介导的自身免疫性疾病。尽管现有免疫疗法已取得长足进步，但仍有约15%的患者属于“难治性”病例，对常规免疫抑制剂反应不佳，且面临长期的激素副作用和沉重的经济负担。既往研究提示，Th17.1细胞（IL-17+ IFN-γ+的CD4+ T细胞亚群）在MG发病中具有核心致病作用，且与疾病严重程度密切相关。Th17.1细胞不仅能分泌IFN-gamma和IL-17A等促炎细胞因子，还表现出显著的糖皮质激素抵抗性。JAK-STAT信号通路是免疫细胞发育分化的调控枢纽，其中JAK2/STAT3更是驱动Th17.1细胞分化的核心步骤，因此通过JAK抑制剂干预该通路或为治疗难治性MG的新策略。因此，本研究中我们探索托法替布治疗难治性重症肌无力的临床可行性并深入探究其可能的治疗机制。

研究方法

本研究采用了“单细胞测序-临床研究-细胞实验”的多维度设计：

单细胞测序分析：发现MG患者外周血免疫谱发现MG患者CD4+ T细胞中JAK2表达显著升高，且Th17分化相关分子通路异常活跃。

小样本临床研究：单中心临床研究纳入19名难治性全身型MG患者。纳入患者接受口服托法替布（5 mg，每日两次）治疗24周，同时逐步调整口福激素剂量。研究主要终点为24周时QMG评分的变化。

体外机制研究：通过Bulk RNA测序及MG患者原代1细胞分化实验，探索托法替布对MG患者外周血CD4+ T细胞及Th17.1细胞的影响。

研究结果

MG患者CD4+ T细胞的JAK2表达及Th17细胞分化通路显著上调

单细胞测序分析显示，与健康对照者相比，初治MG患者CD4(+) T细胞中与Th17分化相关的信号通路异常激活，尤其是JAK2表达明显升高。同时我们进一步证实致病性Th17.1细胞比例与患者疾病严重程度（MG-ADL与MGC评分）呈正相关。这表明JAK2介导的Th17.1细胞分化在难治性MG的发病机制中发挥关键作用。

该研究最终纳入19例难治性gMG患者，其平均年龄为44.3岁，其中89%为AChR抗体阳性，74%的MG患者在入组前曾接受过至少两种免疫抑制剂治疗。

托法替布治疗显著改善难治性MG患者临床结局与激素反应

接受托法替布治疗4周后直至研究终点24周，MG患者QMG（平均改善6.2分，SEM=1.51）、ADL（平均改善3.6分，SEM=0.78）、MGC（平均改善6.6分，SEM=1.7）等评分持续改善。在第24周时，52.6%（10例）的MG患者达到症状最小表达状态（ADL为0-1分）。同时患者自第16周起服用泼尼松剂量显著下降（终点时降为13.68 mg）。所有MG患者在接受托法替布治疗期间均未发生严重不良事件。

托法替布可显著抑制患者PBMC中IL-6和IL-23的表达

对接受托法替布治疗前后的MG患者PBMC细胞进行转录组测序，结果表明托法替布可抑制与Th17.1细胞分化相关的关键细胞因子IL-6和IL-23的表达，而非广泛抑制整个Th17细胞相关通路。此外接受治疗后MG患者IFN-γ 的转录水平显著降低，这些结果提示托法替布可能通过靶向调控Th17.1细胞相关免疫通路改善MG病情。

托法替布治疗可显著抑制致病性Th17.1细胞中p-STAT3的表达

我们对治疗前后的MG患者体内CD4⁺ T细胞亚群的表达水平进行流式分析，结果表明托法替布治疗虽未显著改变总CD4+ T细胞、Th1及Th17.1细胞的比例，但能明显提升Tregs比例。同时我们发现治疗后MG患者血清IL-10水平升高，表明托法替布可促进MG患者恢复免疫平衡。

通过进一步的磷酸化流式检测，我们发现在MG患者的CD4+ T细胞中，托法替布可抑制STAT3的磷酸化水平，其中以Th17.1和Th1细胞的p-STAT3抑制最为显著。体外实验进一步证实，在Th17.1极化条件下，托法替布能选择性抑制Th17.1细胞（IL-17+ IFN-γ+）及ex-Th17细胞（IL-17- IFN-γ+）的分化，同时显著降低其分泌的致病性细胞因子IL-17A和GM-CSF的水平。这些结果表明，托法替布通过靶向抑制p-STAT3水平，有效阻断了Th17.1细胞的分化与致病功能。

结论

本研究证实，托法替布可有效改善难治性MG患者的临床症状与激素反应，且耐受性良好。通过进一步的实验证实托法替布通过抑制p-STAT3、IL-6与IL-23等细胞因子，通过阻断Th17.1细胞的JAK-STAT3通路从而抑制致病性Th17.1细胞的分化与功能，同时恢复MG患者的免疫平衡。该研究为靶向Th17.1细胞治疗难治性MG提供了新的治疗思路。